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常见核酸染料选择浅析

时间:2016-08-17 10:58来源:生物吧 作者:管理员 点击:
常见核酸染料选择浅析 ( 李路军 河南农业职业学院 植物科学系 河南 郑州 450000 ) 摘要: 由于只需简单温和的物理方法(光照)激发和检测,荧光染料是研究生物学微观世 界特别是核
常见核酸染料选择浅析
( 李路军 河南农业职业学院 植物科学系 河南 郑州 450000 )
摘要: 由于只需简单温和的物理方法(光照)激发和检测,荧光染料是研究生物学微观世 界特别是核酸时最常用的示踪工具之一。DNA 电泳后检测凝胶的 EB 大概是最为人熟知的荧 光核酸染料。除了染胶,荧光核酸染料还可用于荧光原位杂交中作为常见的复染剂。下面比 较一下在分子生物学实验和细胞学实验中常用的荧光染料。
关键词:核酸染料、EB、GeneFinder、Goldview、SYBER greenI、GelRed 、GelGreen
引言:
作为生物体内的重要的大分子,核酸是研究生命现象与本质的物质基础,通过对它们的 理化性质、复制与转录、表达与调控等的研究,可以了解生命有关的本质规律。因此,对核 酸的研究具有及其重要的意义。但核酸肉眼不可见,对其的研究主要是借助一定的仪器来观 察它的形态、大小、表达量,其中最常见的也是最简单的是琼脂糖凝胶电泳。EB(溴化乙锭) 是实验室最常用的核酸染料,有着简单、快速、灵敏度高的特点,但是由于其有着强烈的致 突变能力和中度致癌性,对实验者和周围环境都有着较大的危害。溴化乙锭(EB)是分子生物 学实验室常用的一种核酸荧光染料。但是,由于 EB 是一种强烈的致癌物,因此,如何消除 EB 对实验室的污染,是分子生物学实验室安全所必须面对的一个难题。
A A A Abstract bstract bstract bstract:Because only needs the simple temperate physical method (illumination) to stimulate and the examination, the fluorescent dye studies the biology microcosm is when specially the nucleic acid one of most commonly used tracing tools. After DNA electrophoresis, examines the gelatin EB is the fluorescence nucleic acid dye which probably the most person knew very well. Except dyes the rubber, the fluorescence nucleic acid dye may also use in the fluorescence home position hybrid taking the common counterstain. Following compares in the molecular biology experimentand the cytology experiment thecommonly usedfluorescent dye.
Key Key Key Keyword: word: word: word: Nucleic acid dye,EB, GeneFinder,Goldview,SYBERgreenI,GelRed, GelGreen
Introduction Introduction Introduction Introduction: In the achievement organism's important macro-molecule, the nucleic acid is studies the biological phenomena and the essential material base, through to their physics and chemistrynature, the duplication and the duplication, the expression and the regulation and soon research,may understand the life related essence rule. Therefore, has and the vital significance to the nucleic acid research. But the nucleic acid naked eye is not obvious, is mainly draws support fromcertain instrument to its research to observeits shape,the size, the expression quantity, what mostcommon is also the simple is the agarose gel electrophoresis.EB (bromination second grade spindle) is the laboratory most commonly used nucleic acid dye, has simply, fast, the sensitivity high characteristic, but because it has intense sends the sudden change ability and the moderate carcinogenicity, has the big harm to the laboratory technician and the environment. Bromination second gradespindle (EB) is themolecular biology laboratory commonly usedone kind ofnucleic acid fluorescent dye. But, because EB is one kind of intense careinogen, therefore, how to eliminate EB to the laboratory pollution, is a difficult problem which the molecular biology laboratorysecurity mustface.
1.EB 1.EB 1.EB 1.EB 核酸染料
溴化乙锭(EB)是一种常规核酸染料,被广泛应用于观察、检测琼脂糖凝胶与聚丙烯酰 胺凝胶中的 DNA 或 RNA。但 EB 是一种强诱变剂,并有中等毒性[1] ,对人体有潜在危害性。 废弃的 EB 染液易污染环境,必须进行净化处理[3]。EB 本身在紫外下不发光,能与单链、 双链甚至三链 DNA 高效结合并发出明亮的橙色荧光,一直是琼脂糖核酸电泳最常用的荧光染 料。EB 的使用非常简单方便,电泳结束后染色可获得最佳效果,也可以在制胶时加入进行 前染。前染有利于节约时间,但是易出现条带变形拖尾等问题。EB-DNA 结合物会导致染料 的光漂白和 DNA 单链断裂,且具有潜在的诱变作用。另外,EB 被广泛用于观察、检测琼脂 糖凝胶与聚丙烯酰胺凝胶中的 DNA/RNA 。其含有一个可以嵌人 DNA 堆积碱基之间的一个三 环平面基,它与 DNA 的结合几乎没有碱基序列特异性。在高离子强度的饱和溶液中,大约每 2.5 个碱基插人一个溴化乙锭分子。当染料分子插人后,其平面基团与螺旋的轴线垂直并 通过范德华力与上下碱基相互作用。这个基团的固定位置及其与碱基的密切接近,导致染料 与 DNA 结合并在紫外线激发下呈现红色荧光,其荧光产率比游离染料有所增加[4]。EB 可反 复使用、重复性高,在平时实验中发现 EB 胶反复凝融 4 次染色效果还能得到保证。在电泳 实验或其他核酸分离实验中,常用 EB 作非放射性的 Marker,来识别和显示核酸条带。尽管 EB 是一种高效的显色剂,但它的高危险性要求特殊的安全管理和回收流程。EB 可以通过皮 肤吸收,因此应当避免一切与 EB 的直接接触。另外,EB 对皮肤,眼睛,口腔和上呼吸道系 统有刺激性作用。应将 EB 安全密封,并密闭存放于干燥避光处。但其有一个致命的缺点就 是可诱发突变,具有潜在致癌性,且具有中等毒性,可能对操作人员造成危害和对环境造成 污染[7].因此实验结束后,应对含 EB 的溶液及其污染物进行净化处理再行弃置,以避免污 染环境和危害人体健康。
1.1.EB 核酸染料的特点:
1. 安全性:溴化乙锭可以嵌入碱基分子中,导致错配。EB 是强诱变剂,具有高致癌性 2. 灵敏度:可以检测出 l~10ng 的样本 3. 适用范围:凝胶中有游离的EB(0.5ug/ml)时,可以检测到少至10ng 的DNA 条带
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