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WB 或IP 样品制备的技术指导

时间:2016-08-24 14:04来源:生物吧 作者:管理员 点击:
物理或机械的方式破碎样品 在WB和IP实验中,破碎细胞或组织与选择和配制裂解液一样重要。比起一些更软的组织(如脑组织),在准备WB或IP的样品时,紧密的纤维组织(如肌肉组织)
物理或机械的方式破碎样品

在WB和IP实验中,破碎细胞或组织与选择和配制裂解液一样重要。比起一些更软的组织(如脑组织),在准备WB或IP的样品时,紧密的纤维组织(如肌肉组织)需要更剧烈的方法;对于培养的原代细胞或细胞系,在准备WB和IP的样品时需要一定的机械搅拌去提取蛋白。机械破碎样品常规的方法和设备如下:
 
 
01/ 组织高速匀浆仪
 
通常破碎体积大的植物或者动物组织需要用可旋转、带有刀片的匀浆仪或者搅拌器。这些仪器通常通过一个电动的马达带动不锈钢可旋转切割刀片,可以从顶部或者底部启动,这个过程中产生很少热量,但是样品需要置于冰上。匀浆仪的转速和刀片的尺寸,需要根据样品的体积和组织大小来确定。大部分匀浆仪产生的颗粒较大,然而,一些带特殊旋转刀片的匀浆仪可以切割产生小到4微米且一致的颗粒,这种破碎对于一些小的单细胞样本(如细菌、酵母)效果不明显,但是对于大块的、骨质的、纤维较多的样本特别适用。
 
 
02/ 研钵和研磨匀浆器
 
研磨匀浆器特别适合软组织和细胞悬液,它是由一个不锈钢或玻璃的活塞样槌头和一个玻璃槌管组成,匀浆器槌头表面和槌管壁是磨砂面的,以提高研磨的效果。槌头在管底部的缝隙通常是几百微米,小的组织(通常被切割成1mm 的小段)放在槌管底部,同时加有预冷的少量裂解液,槌头在匀浆槌管中旋转可以使小的组织碎片粉碎。某些组织研磨相关仪器也会加入玻璃粉,氧化铝珠或细沙去增强样品的粉碎。
 
值得注意的是,在加入裂解液之前,一般陶瓷或者石制的研磨钵和冷冻过的研磨棒可以用来磨碎部分已经用液氮动过的固体组织。其他更进一步的组织粉碎的方法可以与冷冻研磨一起合用。
 
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