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IHC实验前知识准备

时间:2016-08-24 12:51来源:生物吧 作者:管理员 点击:
IHC 实验前知识准备 购置用于实验研究检测 抗体 的注意事项 抗体是完成免疫组织化学染色的主要试剂,可将其分为特异性一抗 ( 或称一级抗体 ) 和第二抗体 ( 或称二级抗体,也可称为

IHC实验前知识准备

 

购置用于实验研究检测抗体的注意事项

 

    抗体是完成免疫组织化学染色的主要试剂,可将其分为特异性一抗(或称一级抗体)和第二抗体(或称二级抗体,也可称为二抗或标记二抗),尤其特异性一抗更为重要。目前国内外市场各种特异性抗体日益增多,销售公司也很多,大多数使用者直接选用市售现成商品。上海优宁维公司是目前国内最专业、最全面的抗体公司,可以免费抗体查询服务。

 

    抗体质量的好坏是完成免疫组化工作的关键,目前可从二条途径获得。首先可从市场上获得商品化抗体,这是主要来源。但有时为了研究或证实一种新的抗原成分,而又无相应抗体可购买时,往往需要自己制备抗血清。当然,也可以从文献上查找,并向作者索要。

 

    原则上应选择在较高稀释度时染色较佳、背景较低、结果稳定、重复性好的商品化抗体。目前供IHC研究和诊断用的抗体种类繁多,制造商如林,不同厂家的相同抗体,其价格、包装及抗体的最佳工作浓度差异较大。在选购时,应多听取有实践经验专家的意见。另外,还应考虑抗体的种属。

 

    一般用于诊断、鉴别诊断的抗体最常见的是兔和小鼠的单克隆抗体,并注明可用于诊断,其价格也较昂贵;而用于研究用的抗体,其种属较多,例如兔、小鼠、羊、大鼠和鸡的抗体等,其价格相对廉价,品种较新。购买抗体前要了解清楚是否与实验室现有的检测试剂配套和能用于何种切片类型检测,例如冰冻切片或石蜡切片,一般需购置能用于石蜡切片检测的。

 

    此外,还应了解清楚是否需要何种前处理(酶消化或抗原修复),以及抗体的最佳稀释度等问题。最好购置能用于石蜡切片,稀释度在1100以上的抗体。

 

    在购置用于实验研究检测的抗体时,应认真阅读其产品的说明介绍。因实验研究用的抗体种类特别繁多,而且很新,检测的对象往往是各种动物标本,如狗、兔、猴、大鼠、小鼠、猪等。

 

    各厂家生产的抗体,尤其是基因抗体,往往是针对人、或某种动物的,或各种动物有交叉,但有一部分抗体只针对人或鼠,对其他动物无交叉反应,如需检测犬类或兔组织标本中的某些抗原时,就无法检测到。因此,在选择此类抗体时,一定注意掌握其背景资料。

 

    另外,购置抗体后,一定请公司告知其生产日期、商品号(catlot)、检测范围和用何种前处理方式等。

 

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