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细胞表面染色操作流程

时间:2016-08-17 11:09来源:生物吧 作者:管理员 点击:
人外周血单个核细胞(PBMCs)及悬浮细胞系的细胞表面染色 1. 将 PBMCs 或细胞系细胞重悬于 BD Pharmingen Stain Buffer (BSA) (货号:554657) 或 Stain Buffer (FBS) (货号: 554656) 。 2. 每管加入 1ml 预冷
人外周血单个核细胞(PBMCs)及悬浮细胞系的细胞表面染色 
1. 将 PBMCs 或细胞系细胞重悬于 BD Pharmingen Stain Buffer (BSA) (货号:554657) 或 Stain Buffer (FBS) 
(货号: 554656) 。 
2. 每管加入 1ml 预冷的 BD Pharmingen Stain Buffer,300g ,4°C 离心 5 分钟。重复 2 次。 用预冷的 BD Pharmingen Stain Buffer 调整细胞终浓度为 2 x 107 cells/ml。 
3. 将 100µl 细胞悬液(106 细胞)转移至 12 x 75 mm 圆底聚丙烯试管 或圆底微孔板中。 
4. 每管加入适量特异性表面抗体,冰上避光孵育 20 分钟。 
5. 用适量的 Stain Buffer 清洗细胞 2 次(微孔板 200µl/孔/次,试管 1ml/管/次),300g 离心 5 分钟。
仔细吸去或倒掉上清。 
6. 轻拍试管或微孔板混匀细胞。 
7. 对于间接染色,于 100µl Stain Buffer 中依说明书加入适量二抗或链霉素标记的抗体,重复操作步
骤 4 和 5。 
8. 适量 Stain Buffer 重悬细胞(微孔板 200µl/孔,试管 0.5ml/孔)。 
9. 上流式细胞仪检测并分析数据。 
备注: 
1. PBMCs 制备请参考 Ficoll 产品或红细胞裂解液的使用说明书 
2. 多数情况下,BSA 已足够作为封闭剂。若实验需求更严格,需使用 FBS。 
3. 可通过测试确定最佳的抗体使用量。根据荧光抗体活性的不同,染色时间可适当延长(> 45 min)。 
4. 如果不能及时上机检测,可将已染色的细胞在多聚甲醛(或 BD Cytofix Buffer,货号: 554655,详
细操作请见说明书)中 4°C 固定 30 分钟,清洗细胞,之后用适量 Stain Buffer 重悬细胞,4°C 避光
保存。固定的细胞需要尽快上机检测。 
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